پزشکان بدون مرز درمان
خانه / آزمایشگاه / مواد‌ مصرفی در آزمایشگاه کشت سلولی

مواد‌ مصرفی در آزمایشگاه کشت سلولی

مواد‌مصرفی در آزمایشگاه کشت سلول معمولا یک بار مصرف می‌باشند . فلاسک کشت سلولی که شرایط استریلی را برای رشد سلول ها فراهم میاورد، فلاسک ها بر اساس سطحی که دارند ممکن است 25cm² یا 75cm² باشند. فلاسک ها اغلب دارای درب فیلتردار هستند( بهترین نوع انهاست ) که موجب کنترل تبادل co2 و مانع ورود باکتری ها و عامل عفونی میشود.

به گزارش خبرنگار سایت پزشکان بدون مرز، فلاسک های ساده و بدون فیلتر را باید هنگام قرار دادن در انکوباتور ، درب آن را کمی شل کنیم تا ورود و خروج ‌co2 امکان پذیر باشد و هنگام خروج ،درب انکوباتور را کمی باز کرده و درب فلاسک را همانجا سفت میکنیم و سپس بیرون میاوریم تا مانع ورود هر گونه آلودگی به داخل آن شویم.

همچنین طرز قرار گرفتن فلاسک در دست باید به صورت مایل باشد زیرا در حالت افقی ماندن مایع در ناحیه ی گردن فلاسک باعث آلودگی میشود ، البته به صورت مایل گرفتن به مدت طولانی هم صحیح نیست زیرا سلول ها نمیتوانند به خوبی تغذیه شوند و می میرند، در نهایت سطح فلاسک را استریل کرده و زیر میکروسکوپ شرایط آن را بررسی میکنیم.

پیپت : یک سری شیشه ای هستند برای کشیدن محیط کشت و هر گونه مایع ،که قابل شست وشو و استریل هستند و بعد از شست وشو و خشک کردن ، پنبه ای سر آن میگذارند تا هوایی که میکشد هوای استریلی باشد، یک سری هم از نوع پیپت پاستور شیشه ای یک بار مصرف هستند.

محیط کشت : اصلی ترین بستری که برای فراهم آوردن شرایط لازم و رشد سلول ها استفاده میکنیم.

محیط کشت = محیط پایه + سیستم بافری +سرم + آنتی بیوتیک

محیط کشت های مختلفی داریم اما همه ی آنها حداقل اجزایی که باید داشته باشند عبارتند از :

ویتامین – پپتید – لیپید -هورمون- نمک مثل mgcl2- قند – آمینو اسید همچنین حاوی یک سیستم بافری مناسب که اکثرا ¯HCO3 (بیکربنات )دارد به علاوه ی سرم FBS (سرم جنین گوساله) یا FCS (سرم جنین گاو) که در واقع ماده ی مغذی سرشار از مواد مناسبی برای رشد سلول است که باعث بهبود کشت میشود که اگر سلولی را بدون سرم در محیطی کشت دهیم مرگش قطعی است ، و در نهایت رنگ اضافه میکنیم که حالت معرف دارد و اغلب از فنول رد (phenol-Red) که معرف اسیدی یا قلیایی بودن است استفاده میشود .

‌PH نرمال = رنگ قرمز -نارنجی ⁄ در PH قلیایی = رنگ ارغوانی ⁄ PH اسیدی ( زمانی که مواد غذایی را مصرف کرده و مواد سمی خود را آزاد کرده که نشان دهنده تعویض محیط کشت است ) = رنگ زرد میشود .

انواع محیط کشت : RPMI 1640 – MEM- DMEM که بر اساس نوع اسید امینه با هم متفاوتند.

گاهی اوقات محیط کشت را میتوان بصورت محلول آماده خریداری کرد که استریل و فیلتر شده است و فق به ان FBS اضافه میکنیم ، اما اگر بخواهیم محیط کشت را خودمان تهیه کنیم باید از پودر استفاده کنیم و آن را به مقدار مورد نظر با آب مقطر مخلوط کرده و سرم FBS یا FCS به مقدار 5_20% اضافه کرده و در نهایت آنتی بیوتیک که مهم ترین آن ها‌ Pen strep ( پنی سیلین100 Au⁄ml + استرپتومایسین100 Mg⁄ml ) است .

همه ی این مواد به صورت استریل با هم مخلوط شده و آماده میشود برای فیلتر کردن با فیلترهای ‌0.2 برای جلوگیری از ورود میکروب .

تلگرام